老抗体在诊断病理中的新用法
年12月24至25日，年肿瘤病理诊断新进展学习班暨陈国璋和卓华教授专题"免疫组化诊断线索和陷阱"培训班在福州隆重召开。本次会议主要由国际知名临床病理医院陈国璋教授(Prof.JohnChan)和卓华教授(Prof.CheukWah)，以"免疫组化诊断线索和陷阱"为专题讲座，全面、系统地介绍免疫组织化学诊断的思路与方法、质控、抗体的合理选择及应用等方面的内容。为了让大家更灵活地掌握"老"抗体的使用，我们专门将陈国璋教授讲课内容中《"老"抗体在诊断病理中的新用法》部分进行翻译和加工整理，并引用课件中相关的图表，仅供大家参考学习。
"老"抗体不是指过期的抗体，而是指在很多实验室已广泛使用多年的成熟抗体。接下来，我们介绍一下一些"老"抗体在诊断病理中的新用途。
S－蛋白
S－蛋白是传统的施旺细胞和黑色素细胞的标志物，现在可作为涎腺类似乳腺分泌性癌(MASC)的标志物。MASC是新近认识的一种涎腺肿瘤，其组织形态学类似乳腺的分泌性癌，具有相同的染色体易位t(12，15)及ETV－NRTK3融合基因。MASC的临床表现与腺泡细胞癌相似，属于惰性肿瘤，总生存率和腺泡细胞癌没有明显差异。MASC的组织学特征与腺泡细胞癌相似，呈宽大推挤性的边界伴局灶浸润。排列方式主要有：乳头状囊状结构、微囊状－筛状、岛屿状结构、甲状腺滤泡样结构。具有低级别的核，空泡状非特异性的腺上皮细胞，缺乏嗜碱性的酶原颗粒，腔内可见泡状分泌物(图1)。由于MASC与腺泡细胞癌的形态学有广泛的重叠，在以往诊断的腺泡细胞癌中有20%～30%实际上是MASC。现在我们可以采用一组抗体来鉴别MASC和腺泡细胞癌，如S－蛋白、乳腺球蛋白、STAT5阳性，DOG1阴性支持MASC，其中S－蛋白是很有用的抗体(图2)。需要注意的是，除了MASC之外，还有其他S－蛋白阳性的涎腺腺癌，如导管内癌(低级别涎腺导管癌)也强表达S－蛋白。
图1涎腺的类乳腺分泌性癌(MASC)呈宽大推挤性的边界伴局灶浸润，主要排列成乳头状囊状结构，微囊状－筛状、岛屿状结构，以及甲状腺滤泡样结构 HE 低倍放大
图2MASC，胞质/核弥漫强表达S－蛋白 Polymer法 低倍放大
图3壶腹部活检，低倍镜中央可见正常腺体，左上角和右下角腺体呈低级别异型增生 HE 低倍放大
图4CD10免疫组织化学显示中央正常腺体为连续阳性，左上角和右下角腺体不连续阳性 Polymer法 低倍放大
图5Calretinin在鼻腔嗅神经母细胞瘤中弥漫核质强阳性Polymer法 低倍放大
图6正常结肠的黏膜肌或黏膜内的神经纤维和神经节细胞Calretinin染色阳性 Polymer法 中倍放大
图7先天性巨结肠病Calretinin完全阴性，仅黏膜下的神经显示弱阳性 Polymer法 中倍放大
图8正常甲状腺组织(上)CD56阳性，甲状腺乳头状癌(下)CD56表达缺失或减弱 Polymer法 中倍放大
图9肉瘤样间皮瘤细胞呈梭形，异型性明显，与软组织肿瘤难以鉴别 HE 低倍放大
图10肉瘤样间皮瘤D2－40弥漫性胞膜/胞质阳性 Polymer法 中倍放大
图11p16在浆液性癌中呈弥漫强阳性 Polymer法 低倍放大
图12宫颈腺癌，常常所有肿瘤细胞p16强阳性 Polymer法 中倍放大
图13骨巨细胞瘤的单核细胞表达p63 Polymer法 低倍放大
图14骨巨细胞瘤的单核细胞不表达p40 Polymer法 低倍放大
CD10
CD10是传统的生发中心的标志物，现在可用于辅助诊断恶性胆管上皮肿瘤。CD10在正常胆管及反应性增生黏膜的腔面呈连续强阳性，在胆管上皮低级别异型增生和腺瘤中呈不连续阳性，在高级别异型增生及浸润性癌中阴性(图3，图4)。因此，通过CD10的表达模式有助于区分良恶性肝外胆管病变。
Calretinin
Calretinin是传统的间皮细胞的标志物，现在可作为新的神经元/神经的标志物。正常的鼻腔嗅神经上皮Calretinin阳性，有报道显示几乎所有的嗅神经母细胞瘤(20/21)都表达Calretinin(图5)，因此Calretinin对鼻腔嗅神经母细胞瘤的诊断和鉴别诊断具有重要的价值。此外，Calretinin也成为先天性巨结肠病新的标准诊断工具。正常结肠的黏膜肌或黏膜内的神经纤维和神经节细胞Calretinin染色阳性(图6)，然而先天性巨结肠病中神经纤维，Calretinin完全阴性，仅黏膜下肥大的神经显示弱阳性(图7)。Calretinin染色完全阴性，可能是真的阴性，也可能是由于免疫组织化学染色失败造成。只有当组织中肥大细胞(内对照)阳性或外对照(正常的结肠裱在同一张切片上)阳性时，才能判定免疫组织化学结果为有效。Calretinin是诊断先天性巨结肠病既简单又有效的工具。
CD56
CD56是传统的NK细胞和神经的标志物，现在可用来辅助诊断甲状腺乳头状癌。正常甲状腺组织，良性甲状腺病变、滤泡性腺瘤和滤泡癌CD56阳性，而90%的甲状腺乳头状癌(包括滤泡亚型乳头状癌)CD56表达缺失或减弱(90%的肿瘤区域失表达)(图8)。因此，CD56有助于诊断甲状腺乳头状癌。
β－catenin
β－catenin是传统的纤维瘤病的标志物，现在可用来辅助诊断许多伴有β－catenin核转位的肿瘤。目前发现越来越多具有β－catenin核转位的肿瘤，例如纤维瘤病、筛状－桑椹状变异型甲状腺乳头状癌、血管外皮瘤、鼻咽血管纤维瘤、淋巴结内栅栏状肌纤维母细胞瘤、Sertoli细胞瘤、卵巢微囊性间质瘤、胰腺实性－假乳头状瘤、涎腺基底细胞腺瘤/腺癌以及双表型鼻窦肉瘤，这也就意味着β－catenin有助于诊断这些肿瘤。
BerEP4
BerEP4(EPCAM)是传统的上皮标志物，现在可用来辅助诊断遗传性非息肉病性结直肠癌(HNPCC)。HNPCC综合征主要的肿瘤类型为结直肠癌和子宫内膜样腺癌。根据危险因素，在患有这些肿瘤的患者中筛查HNPCC是非常有必要的。错配修复蛋白的免疫组织化学染色(MLH1、PMS2、MSH2、MSH6)有助于发现潜在的HNPCC患者，并能推测出发生异常的基因(表1)。例如：MLH1＋、PMS2＋、MSH2－、MSH6－以及BerEP4＋提示MSH2胚系突变或者EPCAM胚系突变。而MLH1＋、PMS2＋、MSH2－、MSH6－以及BerEP4－提示EPCAM胚系突变，而不是MSH2胚系突变。EPCAM基因突变仅占HNPCC1%～3%。EPCAM(TACSTD1)基因突变是如何引起错配修复基因缺陷？EPCAM是MSH2的上游基因，EPCAM基因胚系突变导致第8号和9号外显子丢失(最后2个外显子)，包括多聚腺苷酸化信号，引起转录终止的解除，由此导致MSH2基因下游部分的连续转录，引起MSH2启动子甲基化，最终使MSH2基因沉默。如果EPCAM阴性，则说明EPCAM基因发生胚系突变(特异性%)；如果EPCAM阳性，可能存在或不存在EPCAM基因的胚系突变。因此，EPCAM阳性不能排除EPCAM胚系突变。
D2－40
D2－40是传统的淋巴管的标志物，现在作为新的滤泡树突细胞肉瘤标志物。众所周知，传统的滤泡树突细胞的标志物CD21、CD35、CD23在一些滤泡树突状细胞肉瘤中表达率很低。由于D2－40的敏感性高、特异性较低，因此对辅助诊断滤泡树突细胞肉瘤有一定的帮助。此外，D2－40可以辅助诊断恶性间皮瘤。众所周知，用传统的间皮瘤的标志物(Calretinin、CK5/6、WT1)很难确诊肉瘤样间皮瘤。D2－40在不同类型的恶性间皮瘤，包括肉瘤样间皮瘤中都具有较高的阳性率，因而对诊断肉瘤样间皮瘤是很有帮助的(图9，图10)。但需注意的是D2－40缺乏特异性。D2－40联合E－cadherin可以辅助诊断脑膜瘤。EMA是脑膜瘤传统的标志物，但相对而言特异性较差。因此，需要其他有用的免疫组织化学标志物辅助诊断那些鉴别困难的病例。可选择生长抑素受体－2a、D2－40和E－cadherin联合检测的方案。D2－40联合E－cadherin染色对不同亚型的脑膜瘤以及转移性脑膜瘤都有较高的阳性率，总阳性率为89.6%。
p16
p16是传统的高危人乳头状瘤病毒(HPV)感染的标志物，现在可以辅助浆液性癌与其他类型肿瘤的鉴别诊断。不同类型的子宫内膜癌和卵巢腺癌的预后不同，因此子宫内膜癌和卵巢腺癌的分类显得非常重要。浆液性癌是高度侵袭性的腺癌。常用的免疫组织化学标志物有p53和WT1。当p53弥漫强阳性或完全阴性，WT1阳性时支持浆液性癌。WT1在卵巢浆液性癌中常常阳性，在子宫内膜浆液性癌中阳性较低。p16在浆液性癌中弥漫强阳性(图11)，而在子宫内膜样腺癌中呈斑驳状的弱阳性。因此，p16有助于鉴别浆液性癌和子宫内膜样腺癌。需要注意的是宫颈腺癌常常所有肿瘤细胞p16强阳性(图12)。此外，p16还可以辅助诊断子宫平滑肌肉瘤。p16阳性是指50%的肿瘤细胞弥漫阳性，子宫平滑肌肉瘤p16阳性率为87%，子宫平滑肌瘤p16阳性率仅为2%。需要注意的是，奇异型平滑肌瘤p16常常阳性。平滑肌细胞弥漫性中－重度异型，丰富的核分裂象加上p16阳性，才支持平滑肌肉瘤的诊断。
p63
p63是传统的肌上皮的标志物，现在可以辅助诊断骨巨细胞瘤。骨巨细胞瘤中的单核细胞表达p63，多核巨细胞很少表达。p63可以用于骨巨细胞瘤和其他富含巨细胞病变的肿瘤的鉴别诊断。由于骨巨细胞瘤只表达TAp63异构体，不表达ΔNp63，因此骨巨细胞瘤的单核细胞只表达p63(图13)，不表达p40(图14)。
本文来源：中华病理学杂志,,46(9):-.
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